Маҷмӯаи ELISA ба марҳилаи сахти антиген ё антитело ва тамғагузории ферментҳои антиген ё антитело асос ёфтааст. Антиген ё антитело, ки ба сатҳи интиқолдиҳандаи сахт пайваст аст, то ҳол фаъолияти иммунологии худро нигоҳ медорад ва ферменте, ки антиген ё антитело нишон дода шудааст, ҳам фаъолияти иммунологӣ ва ҳам фаъолияти ферментро нигоҳ медорад. Ҳангоми муайянкунӣ, намунаи санҷишшаванда (дар он антитело ё антиген чен карда мешавад) бо антиген ё антитело дар сатҳи интиқолдиҳандаи сахт реаксия мекунад. Комплекси антиген-антитело, ки дар барандаи сахт пайдо мешавад, бо шустан аз дигар моддахои моеъ чудо мешавад.
Антигенҳо ё антителоҳои бо фермент ишорашуда илова карда мешаванд, ки онҳо инчунин тавассути реаксия ба интиқолдиҳандаи сахт пайваст мешаванд. Дар ин вақт миқдори фермент дар фазаи сахт ба миқдори модда дар намуна мутаносиб аст. Пас аз илова кардани субстрати реаксияи фермент, субстрат тавассути фермент катализ мешавад, то маҳсулоти ранга шавад. Миқдори маҳсулот мустақиман ба миқдори моддаи санҷидашуда дар намуна вобаста аст, бинобар ин аз рӯи умқи ранг таҳлили сифатӣ ё миқдорӣ гузаронида мешавад.
Самаранокии баланди каталитикии ферментҳо ба таври ғайримустақим натиҷаҳои аксуламали иммуниро афзоиш дода, таҳлилро хеле ҳассос мегардонад. ELISA метавонад барои муайян кардани антигенҳо истифода шавад, аммо инчунин метавонад барои муайян кардани антитело истифода шавад.
Принсипҳои асосии маҷмӯаи ELISA
Он реаксияи мушаххаси антиген ва антителоро барои пайваст кардани объект ба фермент истифода мебарад ва сипас барои муайян кардани миқдорӣ реаксияи рангро байни фермент ва субстрат ба вуҷуд меорад. Объекти ченкунӣ метавонад антитело ё антиген бошад.
Дар ин усули муайянкунӣ се реактив лозим аст:
â Антигени фазаи сахт ё антитело (адсорбенти иммунӣ)
â¡ Фермент бо аломати антиген ё антитело (маркер)
⢠субстрат барои амали фермент (агенти рушди ранг)
Ҳангоми ченкунӣ антиген (антитело) аввал ба интиқолдиҳандаи сахт пайваст мешавад, аммо ба ҳар ҳол фаъолияти иммунии худро нигоҳ медорад ва сипас конъюгат (маркер)-и антитело (антиген) ва фермент илова карда мешавад, ки ҳоло ҳам фаъолияти иммунӣ ва ферментҳои аслии худро нигоҳ медорад. фаъолият. Вақте ки конъюгат бо антиген (антитело) дар барандаи сахт реаксия мекунад, субстрати мувофиқи фермент илова карда мешавад. Яъне, гидролизи каталитикӣ ё реаксияи REDOX ва ранг.
Сояи ранге, ки он тавлид мекунад, ба миқдори антиген (антитело), ки чен карда мешавад, мутаносиб аст. Ин маҳсулоти рангаро бо чашми бараҳна, микроскопи оптикӣ, микроскопи электронӣ мушоҳида кардан мумкин аст, инчунин бо спектрофотометр (асбоби тамғаи фермент) чен кардан мумкин аст. Усули оддӣ, қулай, зуд ва мушаххас аст.